测序技术，蛋白质测序方法

本文目录一览

1，蛋白质测序方法
2，目前用于测序的技术主要有哪些
3，下一代测序技术有几种
4，什么是DNA测序技术
5，DNA测序方法有哪些

1，蛋白质测序方法

Sanger试剂用于鉴定蛋白质和多肽的N－末端氨基酸残基。Edman降解才是氨基酸序列的测定技术。但是它不能测超过40个残基的序列。所以测大的蛋白质的序列时，需要用化学试剂将蛋白质降解为一些肽段。即需要水解。水解时一般用三氟乙酸进行酸水解。酸水解就是加热酸进行水解，而碱水解就是加入碱进行水解。蛋白质一般用酸水解。而酯类则两种水解方式都常用。知道了吗？^_^

蛋白质测序方法

2，目前用于测序的技术主要有哪些

目前常用的测序技术有一代Sanger测序，二代常规的illumina测序，擎科生物推出的快速二代测序技术Fast NGS。三代的Pacbio和Nanopore测序。一代测序技术应用1. PCR产物测序对目的基因的PCR产物进行测序，获取目的基因序列；2. 重测序如克隆产物验证、SNPs、突变、插入、缺失等；3. 分型分析菌分类学鉴定、HLA分型、病毒分型等；4.临床应用肿瘤突变基因的检测和肿瘤个体化治疗，致病基因位点明确并且数量有限的单基因遗传病检测；5.对新一代测序技术的结果进行验证。常规二代测序技术应用1.基因组de novo测序、转录组测序、重测序、扩增子测序、宏基因组测序、染色质免疫共沉淀测序、DNA甲基化测序等。2.在医学上的应用主要包括癌症基因组、遗传病基因组、肿瘤与代谢疾病等。 Fast NGS应用：1.抗体可变区测序；2.TA克隆测序；3.菌种鉴定；4.质粒、病毒、线粒体、叶绿体等小基因组测序；5.基因编辑上可用于sgRNA文库测序、靶基因鉴定、个体基因型检测、基因编辑效率检测。比常规二代测序更快速，更优惠，对样本要求更低。三代测序技术的应用：1.基因组组装；2.全长转录组测序；3.甲基化测序等。

目前用于测序的技术主要有哪些

3，下一代测序技术有几种

按原理分三种：Roche 454 焦磷酸测序，Iiiumina 是边合成边测序，ABI SOLID是连接测序

最近市面上出现了很多新一代测序仪产品,例如美国roche appliedscience公司的454基因组测序仪、美国illumina公司和英国solexatechnology公司合作开发的illumina测序仪、美国appliedbiosystems公司的solid测序仪、dover/harvard公司的polonator测序仪以及美国helicos公司的heliscope单分子测序仪.所有这些新型测序仪都使用了一种新的测序策略——循环芯片测序法（cyclic-arraysequencing）,也可将其称为“新一代测序技术或者第二代测序技术

下一代测序技术有几种

4，什么是DNA测序技术

bac是细菌人工染色体意思，之所以有bac文库的出现，是因为基因组序列太长，测序，以及筛选基因等没有办法完成，所以将基因组片段随机打断成片段，连到载体上构建成一系列的重组子，这样当你需要特定的序列，只需要筛选出自己要的那个bac重组子就行了。说的有点过于简单，不知道你能明白否？末端测序也是采用的双脱氧终止法的。双脱氧终止法的原理是；碱基之间是通过俩个碱基的5磷酸基团和3羟基连接的，双脱氧终止法就是利用了这个3羟基，将3羟基脱氧变成氢键，那么这样下一个碱基的5磷酸基团就没有办法连到前一个碱基上了。所以如果在做测序pcr的时候加一部分正常的dntp(3号位为羟基),加一定量的ddntp(2,3号位都是氢键)，那么在第一个碱基后如果接上去的是dntp,那么就可以接着连第三个碱基，如果连得是ddntp,那么就没有办法连下个碱基形成链终止，在测序pcr中，数以万计的反应，那么就会出现2个碱基后终止的链，也有可能出现3个，4个，n个碱基后终止的链，这样就形成了一系列从一个碱基到n个碱基的序列（其最后一个碱基都是三号位为氢键的，这个应该理解吧）。那么如果我们在连上去的ddntp上连上个荧光基团(四种ddntp连上不同的荧光基团)，那么将这一系列长度的链跑胶，会形成一系列的带，通过每条带最后一个碱基的荧光通过机器就能够区分是什么碱基，将这些碱基拼接好后就是你要的序列了。

DNA测序技术，即测定DNA序列的技术。在分子生物学研究中，DNA的序列分析是进一步研究和改造目的基因的基础。目前用于测序的技术主要有Sanger等（1977）发明的双脱氧链末端终止法和 Maxam和 Gilbert（1977）发明的化学降解法。这二种方法在原理上差异很大，但都是根据核苷酸在某一固定的点开始，随机在某一个特定的碱基处终止，产生 A，T，C，G四组不同长度的一系列核苷酸，然后在尿素变性的PAGE胶上电泳进行检测，从而获得DNA序列。目前 Sanger测序法得到了广泛的应用。http://baike.baidu.com/link?url=S8neqboyOrwW895RyI0CjFWkb6Wt2g6Hjabexm7DcZS8SDM5BR0UQex9rxvJPDkqMVO-Dk9S-PMsU4supZ5xna

5，DNA测序方法有哪些

第1 代测序技术——荧光标记的Sanger 法第一代就不说了。第2 代测序技术——循环阵列合成测序法述第2 代测序技术中, 序列都是在荧光或者化学发光物质的协助下, 通过读取DNA 聚合酶或DNA 连接酶将碱基连接到DNA 链上过程中释放出的光学信号而间接确定的. 除了需要昂贵的光学监测系统, 还要记录、存储并分析大量的光学图像.这都使仪器的复杂性和成本增加. 依赖生物化学反应读取碱基序列更增加了试剂、耗材的使用, 在目前测序成本中比例相当大. 直接读取序列信息, 不使用化学试剂, 对于进一步降低测序成本是非常可取的.在一个正在发生突破瓶颈巨变的领域内, 很难准确预测未来将发生什么.第3 代测序技术——直接测序将基因组DNA 随机切割成大约100 kb 左右的片段,制成单链并与六寡聚核苷酸探针杂交. 然后驱动结合了探针的基因组文库片段通过可寻址的纳米孔阵列. 通过每个孔的离子电流均可独立测量. 追踪电流的变化确定探针杂交在每个基因组片段上的精确位置. 利用基因组片段上杂交探针的重叠区域将基因组片段文库排列起来, 建立一组完整的基因组探针图. 利用计算机算法, 获得完整的基因组序列.

这位是搞分子生物学的吗? dna测序的方法有很多种. 目前最常见的是双脱氧终止法了. 在测序用的缓冲液中含有四种dntp及聚合酶. 测序时分成四个反应, 每个反应除上述成分外分别加入2,3-双脱氧的a, c, g, t核苷三磷酸(称为ddatp, ddctp, ddgtp, ddttp), 然后进行聚合反应. 在第一个反应物中, ddatp会随机地代替datp参加反应一旦ddatp加入了新合成的dna链, 由于其3位的羟基变成了氢, 所以不能继续延伸. 所以第一个反应中所产生的dna链都是到a就终止了; 同理第二个反应产生的都是以c结尾的; 第三个反应的都以g结尾, 第四个反应的都以t结尾, 电泳后就可以读出序列了. 也许这样说你不一定明白. 举一个例子, 假如有一个dna, 互补序列是gatccgat, 我们试着做一下: 在第一个反应中由于含有dntp+ddatp, 所以遇到g, t, c三个碱基时没什么问题, 但遇到a时, 掺入的可能是datp或ddatp, 比如已合成到g, 下一个如果参与反应的是ddatp则终止, 产生一个仅有2个核苷酸的序列: ga, 否则继续延伸, 可以产生序列gatccg, 又到了下一个a了. 同样有两种情况, 如果是ddatp掺入, 则产生的序列是gatccga, 延伸终止, 否则可以继续延伸, 产生gatccgat. 所以在第一个反应系统中产生的都是以a结尾的片段: ga, gatccga, 同理在第二个反应中产生的都是以c结尾的片段: gatc, gatcc, 在第三个反应中产生的都是以g结尾的片段: g, gatccg 在第四个反应中产生的都是以t结尾的片段: gat, gatccgat, 电泳时按分子量大小排列, a反应的片段长度为2, 7; c反应的为4, 5; g反应的为1, 6; t反应的为3, 8, 四个反应的产物分别电泳, 结果为 8 7 6 5 4 3 2 1 a | | c | | g | | t | | 我们可以从右向左读, 为gatccgat, 至此, 测序完成(上面这个图在百度知道中显示不正常, 因为百度知道的网页用的是比例字体, 你如果想看它, 拷贝到记事本中, 用等宽的字体来看).

主要的是双脱氧测序，是最经典的现在测序方法已发展到第三代，可实现高通量测序