分子克隆一般需要在引物上加上限制性碱基序列(6-8个碱基 2-6个保护性碱基)，在引物的5’端加上这些碱基还是会影响PCR扩增，有时会扩增不出来，所以先用没有限制性序列的引物进行一轮扩增,在分子的水平上提供了用于纯化和扩增特定DNA片段的方法,Gene克隆是一个比较直观简单的操作程序,意义与应用-1克隆技术是在20世纪70年代发展起来的，它的出现和应用开辟了分子基因研究的新领域，打开了人类认识、识别、分离和改造基因，创造新物种的大门。
方法:DNA片段的制备，载体的选择，片段与载体的连接。在分子的水平上提供了用于纯化和扩增特定DNA片段的方法。Gene 克隆是一个比较直观简单的操作程序。它具有重要的生物学意义，因为这项技术可以为我们提供一个纯净的基因标本。通常，一个基因总是与细胞中的其他基因在一起。在gene 克隆 technology诞生之前，我们根本无法纯化单个基因，也就是说我们只能研究和开发基因群的结构和功能，而不是特定的基因。意义与应用-1克隆技术是在20世纪70年代发展起来的，它的出现和应用开辟了分子基因研究的新领域，打开了人类认识、识别、分离和改造基因，创造新物种的大门。其成果对工业、农业、畜牧业和医学产生深远影响，将为解决全球面临的能源、粮食和环保三大危机开辟新的途径。
分子克隆一般需要在引物上加上限制性碱基序列(6-8个碱基 2-6个保护性碱基)，在引物的5’端加上这些碱基还是会影响PCR扩增，有时会扩增不出来，所以先用没有限制性序列的引物进行一轮扩增。
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